响应面优化缅甸刺梧桐胶多糖制备工艺（一） 具有复杂的甸刺多支链结构

刺梧桐胶（Karayagum，面优Sterculiagum）是化缅来源于梧桐科（Sterculiaceae）、苹婆属（Sterculia）高大的甸刺刺苹婆树以及其他苹婆属树种的树干分泌物，同时在胭脂树科（bixacene）的梧桐cochlospermumgessypiuma.PDe及其他cochlospemum属的树干中也可以提取到刺梧桐胶。刺梧桐胶主要分布于非洲的胶多苏丹、印度、糖制巴基斯坦，备工在缅甸和我国云南也有大量采胶树种分布。面优刺梧桐胶属于部分乙酰化的化缅弱多糖，具有复杂的甸刺多支链结构，相对分子质量高达900万以上，梧桐经水解产生半乳糖，胶多鼠李糖和半乳糖醛酸以及少量的糖制葡萄糖醛酸。全世界超过90%的备工刺梧桐胶都应用于制药工业，利用其吸水溶胀性和黏性以及一定的面优腹泻治疗作用，主要用作缓释控释胃肠道给药载体。刺梧桐胶也用作食品增稠剂。研究发现增稠剂的适量应用可以显著提高热风干燥方便面的吸水率、蒸煮损失、硬度、胶着性、咀嚼性等综合品质。也有研究表明，使用刺梧桐胶粉包扎伤口，增加了正常肉芽组织，也使表皮生长良好。

本研究以缅甸刺梧桐胶样品为试材（市面上以商品名“雪燕”进行销售），通过探讨超声碱提法优化刺梧桐胶多糖的提取工艺，为刺梧桐胶多糖的进一步开发应用提供理论基础。

一、材料与方法

1、材料与仪器

实验所用刺梧桐胶购自缅甸曼德勒，经云南中医药大学赵荣华教授鉴定为梧桐科苹婆属植物刺苹婆树干分泌物。

葡萄糖（分析纯）购于北京索莱宝科技有限公司；三氯甲烷、正丁醇、浓硫酸、苯酚、氢氧化钠均为国产分析纯；乙醇（95%）购于昆明灌澈试剂有限公司；实验用水为纯净水和超纯水。

SK7210HP超声清洗器：上海科导超声仪器有限公司；bioMate3S紫外分光光度仪：美国thermoFisher公司；Dl-5-b离心机：深圳安科高技术股份有限公司：SaGa-10tF超纯水机：南京易普易达科技发展有限公司。

2、方法

（1）单因素试验

①naoH浓度对刺梧桐胶多糖得率的影响

刺梧桐胶粉末中分别加入液料比为100:1（ml:g）的0.02moll、0.04mol/l、0.06mol/l、0.08mol/l、0.1moll的naoH溶液，超声提取1.5h，考察naoH浓度对刺梧桐胶多糖得率的影响。

②超声时间对刺梧桐胶多糖得率的影响

刺梧桐胶粉末中分别加入液料比为100:1（ml:g）的0.06mol/l的naoH溶液，分别超声提取0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h，考察提取时间对刺梧桐胶多糖得率的影响。

③料液比对刺梧桐胶多糖得率的影响

刺梧桐胶粉末中加入40:1（ml:g）、60:1（ml:g）、80:1（ml:g）、100:1（ml:g）、120:1（ml:g）的0.06mol/lnaoH溶液,超声提取1.5h，考察液料比对刺梧桐胶多糖得率的影响。

（2）响应面实验设计

在单因素试验基础上，以刺梧桐胶多糖得率为响应值,选响应面box一benhnken试验设计对超声提取刺梧桐胶中多糖的工艺参数进行优化。

（3）刺梧桐胶多糖的制备

对超声提取的刺梧桐胶多糖进行中和，浓缩处理,然后加入95%乙醇醇沉过夜，离心分离干燥后得刺梧桐胶多糖（即刺梧桐胶多糖a）。

将刺梧桐胶多糖a采用Sevag法脱蛋白。最后得到的多糖液加入乙醇进行醇沉，重复3次以除去Sevag试剂,最后得到脱脂脱蛋白的刺梧桐胶多糖（即刺梧桐胶多糖b）。

（4）多糖得率的测定

①标准曲线的绘制

将无水葡萄糖置于105℃烘箱中恒重，精密称定无水葡萄糖对照品10mg，置100ml容量瓶中，用超纯水溶解并加至刻度，摇匀，即得。采用苯酚–硫酸显色法，精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置15ml具塞刻度试管中，各加水至2.0ml，摇匀，加入5%苯酚溶液1ml（临用配制），摇匀。再加人浓硫酸5ml，混匀，冷却，放入40℃水浴中加热15min，取出，冷却。以超纯水为空白，使用酶标仪在488nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖标准液质量浓度为横坐标，得到方程y=2.1858x+0.1294，r2=0.999。

②样品测定

精密称取响应面法所得的干燥刺梧桐胶多糖b粉末各10mg，加超纯水溶解并定容至100ml容量瓶中，摇匀。各量取3份1.0ml供试品溶液分别置15ml具塞干燥试管中，照标准曲线的绘制项下的方法，自“加水至2.0ml”起，依法测定吸光度。通过标准曲线线性方程计算刺梧桐胶多糖的得率。

3、数据统计分析

响应面box-benhnken试验采用Design一expertV8.0.6.1软件进行设计与分析。

二、结果与分析

1、单因素考察

（1）naoH浓度对刺梧桐胶多糖得率的影响

naoH浓度对刺梧桐胶多糖得率的影响见图1。随着naoH浓度的增加，多糖的得率先升高后降低，当naoH浓度达到0.06mol/l时，多糖得率达到最大。这可能是由于适宜的naoH浓度可以增加刺梧桐胶多糖的溶出率，而当naoH浓度过大时，可能会破坏多糖结构。因此，naoH浓度选择0.06mol/l。

（2）超声时间对刺梧桐胶多糖得率的影响

超声时间对刺梧桐胶多糖得率的影响见图2。随着超声时间的增加，多糖的得率先升高后降低，当超声时间达1.5h时，多糖得率达到最大。这可能是由于超声能加快多糖溶出，但长时间的超声可能会破坏多糖结构。因此,超声时间选择1.5h。

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